研究背景
自身免疫性甲状腺炎(AIT)是临床和亚临床甲状腺功能减退的主要原因，是一种常见的器官特异性自身免疫性疾病，影响着中国近10%的人口。AIT的特征是甲状腺淋巴细胞浸润和滤泡破坏，血清中存在甲状腺特异性自身抗体。多项研究表明，调节性T细胞(Tregs)的功能缺陷和比例改变与AIT密切相关。吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)是将色氨酸(Trp)降解为犬尿氨酸(Kyn)的限速酶，在树突状细胞、巨噬细胞和B细胞中组成性表达。IDO1介导的Trp消耗和Trp代谢物的产生被证明可以增强Treg分化并抑制自身免疫反应。夏枯草(PrunellavulgarisL.)是唇形科多年生草本植物，具有清肝泻火，明目，散结消肿的功效，许多有经验的中医仍采用夏枯草汤剂治疗甲状腺肿和AIT，然而来自临床试验的研究数据是不够的。本研究旨在评价夏枯草在甲状腺球蛋白(Tg)诱导的Lewis模型大鼠中对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)的影响，并探讨IDO1介导的Treg调控在这些影响中的作用。NO.1
实验方法
1.分组将Lewis大鼠随机分为空白对照组、模型对照组和低、中、高剂量治疗组。构建EAT模型鼠后，灌胃给药，给药方案如下：
2.方法
采用高效液相色谱法对夏枯草的主要活性成分进行分析。通过皮下注射甲状腺球蛋白免疫Lewis大鼠，建立实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)模型。超声测量甲状腺体积，HE染色观察甲状腺淋巴细胞浸润情况。ELISA法测定血清甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和细胞因子水平。流式细胞术检测CD4+CD25+Foxp3+Tregs细胞的百分率。分别用qRT-PCR和Westernblotting检测IDO1mRNA和蛋白表达水平。采用荧光试剂盒和分光光度法测定血清和粪便中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)的含量。
NO.2
实验结果
1.迷迭香酸是夏枯草水提液中的主要生物活性成分图1夏枯草的主要化学成分UPLC-ESI-MS色谱峰分离良好（图1C），通过匹配各色谱峰的分子量，并考虑不同化合物的多级质谱信息，共鉴定出了夏枯草提取物中的10种成分（表1）。结果表明，迷迭香酸是夏枯草水提液的主要成分。为支持上述结果，进一步用迷迭香酸标准品进行了HPLC分析，证实了夏枯草的主要活性成分确实是迷迭香酸（图1D）。
2.夏枯草可减轻Tg诱导的Lewis大鼠的自身免疫性甲状腺炎图2Tg免疫的Lewis大鼠和对照组甲状腺形态学及血清TgAb水平的变化（N=12）
为了评估模型大鼠甲状腺炎的发生情况，在夏枯草给药之前，评价了Tg免疫的Lewis大鼠和空白对照组大鼠的甲状腺体积及血清TgAb水平的变化。通过肉眼和超声检查，均显示EAT组的甲状腺肿明显高于CON组（图2A、2C、2D）。采用超声指数计算平均甲状腺体积，提示EAT组甲状腺体积增加了1.75倍（图2A；P＜0.01）。此外，EAT大鼠血清TgAb水平显著高于CON组（图2B；P＜0.01）。而且，在EAT大鼠中观察到不同甲状腺滤泡大小的间质单核细胞浸润（图2E）。相比之下，在CON组中观察到相对均匀的充满胶质的滤泡，并伴有几乎不可见的炎症浸润。这些结果表明，Tg免疫的Lewis大鼠已发展为EAT。夏枯草治疗12周后，EAT大鼠的甲状腺体积和血清TgAb水平显著下降(图2A和2B)。而且，中高剂量治疗组大鼠的甲状腺炎症评分和血清TgAb水平显著低于模型对照组(图2G和2F)。结果表明：在给予夏枯草水提物后，EAT大鼠的甲状腺炎和甲状腺肿有明显的改善。3.夏枯草可诱导脾脏Tregs细胞的扩增和免疫抑制细胞因子的产生图3脾脏Treg百分比和血清IL-10及TGF-β水平的变化
为探讨夏枯草缓解EAT的潜在机制，评估了脾淋巴细胞Treg亚群。结果显示，模型对照组Tregs细胞的百分比显著低于空白对照组（P＜0.01），三组夏枯草用药组Tregs百分比均显著上升(P＜0.01)。而且，与模型对照组比，中高剂量治疗组大鼠血清IL-10和TGF-β水平有显著增加(P＜0.01)。4.夏枯草可促进IDO1的表达，调节Trp向Kyn的转化图4夏枯草给药后IDO1mRNA和蛋白表达的变化
本研究采用灌胃给药，脾脏和小肠被用于IDO1评估。空白对照组和模型对照组脾脏和小肠中IDO1的mRNA和蛋白表达水平均未见明显差异（图4A和4B，P＞0.05）。另外，与模型对照组相比，夏枯草用药组显著提高了EAT大鼠脾脏和肠道中IDO1mRNA和蛋白的表达，其中低剂量治疗组小肠中仅观察到轻微差异。图5血清和粪便中色氨酸(Trp)和犬尿氨酸(Kyn)的含量为评估IDO1的活性，检测了血清和粪便中Trp和Kyn的含量。和IDO1表达谱一致，空白对照组和模型对照组血清和粪便中的Trp和Kyn水平无明显差异（图5A和5B）。而与模型对照组比，夏枯草用药组大鼠血清Trp水平降低，Kyn水平升高，Kyn/Trp比值升高(P＜0.01)，但在粪便中Trp和Kyn水平却无明显变化（图5A、5B和5C）。NO.3
讨论与结论
本研究以Tg免疫Lewis大鼠为实验动物模型，探讨夏枯草对AIT的作用及机制。通过测量甲状腺体积、血清TgAb水平和浸润评分，观察到在给予夏枯草治疗后，甲状腺炎和甲状腺肿有所减轻。结果提示，夏枯草在一定程度上可通过促进Tregs的增殖和免疫调节因子的产生来改善甲状腺炎；上调IDO1的表达和活性可能是夏枯草促进Tregs扩增的一个潜在机制。本研究首次报道了夏枯草给药后，IDO1相关的脾脏Treg扩增在减轻EAT中的作用，为探究自身免疫性甲状腺炎的免疫发病机制提供了新见解，并揭示了夏枯草在AIT治疗中的潜在价值。预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇
